|
|
Приложение 10 (обязательное)
Общие требования к контролю содержания микроорганизмов в воздухе рабочей зоны 1. Общие положения 1.1. Методика определяет требования к измерению в воздухе рабочей зоны концентраций микроорганизмов, живых клеток и спор, находящихся в составе товарных форм бактериальных препаратов, на биотехнологических предприятиях, а также в воздухе общественных и промышленных зданий. 1.2. К использованию в технологических процессах допускаются штаммы микроорганизмов, разрешенные к применению Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 1.3. Контроль воздуха на содержание вредных веществ биологической природы –продуктов микробного синтеза (ферменты, витамины, антибиотики и др.) проводится так, как это принято для химических веществ. 2. Требования к отбору проб 2.1. Отбор проб воздуха для контроля содержания микроорганизмов проводится путем аспирации их из воздуха на поверхность плотной питательной среды. 2.2. Отбору проб должна предшествовать краткая характеристика микроорганизмов: указываются семейство, род, вид, штамм, морфологическая характеристика колоний на твердой питательной среде и оптимальные условия роста колоний на твердой питательной среде (рН, Т°). 2.3. Отбор проб воздуха проводят: - при засеве инокуляторов в зоне дыхания и между инокуляторами; - при отборе проб из инокуляторов; - при засеве посевных аппаратов (при условии прямого засеивания); - при отборе проб из посевных аппаратов у пробника и между посевными аппаратами; - при отборе проб из ферментеров; - при спуске культуральной жидкости из ферментеров в коагуляторы или прямо на фильтрацию. Если в технологическом процессе имеет место сушка биомассы, то отбор проб проводится: - при перемешивании; - при выгрузке из сушильных аппаратов; - при фасовке биомассы. Перечисленные точки отбора ориентировочные и на каждом предприятии устанавливаются индивидуально с учетом данных валидации, характеристик процесса, методологии тестирования и т. п. 2.4. При текущем контроле в одном помещении число контрольных точек должно быть не менее трех. 2.5. Для сравнительного анализа концентраций микроорганизмов в воздухе рабочей зоны отбор проб должен проводиться не реже 1 раза в неделю в аналогичной по интенсивности технологического процесса временной период. 2.6. Объем пробы воздуха должен быть достаточным для обнаружения микроорганизмов. Он устанавливается опытным путем с учетом характеристик используемого пробоотборника и концентрации микроорганизмов в тестируемой зоне. Примечание. Для импакторов и центрифужных пробоотборников одним из ограничивающих факторов является высыхание поверхности агара при больших объемах проб, а так же возможность повреждения поверхности агарового слоя (растрескивание). 2.7. Отбор проб проводится с концентрированием воздуха на чашке Петри с посевной средой. Отбор проб на содержание микроорганизмов проводят в рабочей зоне; высота установки прибора 1,5 м от уровня пола. 3. Характеристика метода 3.1. Метод основан на аспирации микроорганизмов из воздуха на поверхность плотных питательных сред – элективных (избирательных для данного микроорганизма) или элективно-дифференциальных (путем добавления в среду ингибиторов – антибиотики, желчь, молочная кислота, красители; цветных индикаторов или других специфических химических веществ, позволяющих выявить диагностические признаки данного микроорганизма). После инкубации в термостате производится подсчет выросших колоний по типичным морфологическим признакам. Примечания. 1. Выбор питательной среды является одним из важных факторов. Базовой средой для культивирования бактерий является среда № 1(МПА)*, среда №2 (агар Сабуро) и солодовый агар для культивирования дрожжей и мицелиальных грибов**. Посевы бактерий выращивают в термостате при t 35–40 °С в течение 24–48 ч, культуры дрожжей и грибов – при t 25–30 °С в течение 72 и более часов. 2. Перед отбором проб разлитые на чашки Петри или пластины питательные среды выдерживают в термостате при 137 °С в течение 24 ч для подтверждения стерильности. Проросшие чашки бракуют. 3. Ростовые свойства питательных сред должны быть проверены соответствующими тест-штаммами. 3.2. Микроорганизмы, выросшие на чашке Петри, подлежат макро- и микроскопической идентификации. К макроскопическим признакам относятся форма и размеры колоний, цвет, консистенция, к микроскопическим признакам – форма (кокки, бациллы, овоиды и т. п.), подвижность (количество жгутиков), отношение к окраске по Граму, наличие спор и капсул. 3.3. Для дальнейшей индикации и дифференциации микроорганизмов могут быть использованы биохимические методы, различные автоматизированные системы, а также любые современные методы идентификации микроорганизмов. 3.4. Предел измерения от 1 до 5 х 106 кл/м3. 4. Приборы и посуда 4.1. Для бактериологического анализа воздуха используют импактор воздуха микробиологический «Флора-100» (ТУ 64-098-33–95). Примечание. Современная отечественная модель – высокопроизводительный импактор «Флора 100» работает в автоматическом режиме, отбирает заданный объем воздуха и осаждает биологический аэрозоль на чашку Петри с плотной питательной средой. Импактор полностью заменяет широко используемый для контроля прибор Кратова и превосходит его по всем техническим характеристикам (точность определения, масса, габариты, скорость пробоотбора, автоматический контроль параметров пробоотбора и диагностики неисправностей). Импактор «Флора 100» прошел государственные испытания и рекомендован Комитетом по новой технике (протокол № 7 от 26.12.95) к применению в медицинской практике. 4.2. Методику проведения контроля с использованием импактора «Флора-100» рекомендуется согласовывать с разработчиком импактора для уточнения времени аспирации в зависимости от особенностей контролируемой микрофлоры. 4.3. Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (ТУ 64-1-791–77). 4.4. Секундомер ГОСТ 9586–75 4.5. Чашки бактериологические, плоскодонные, стеклянные диаметром 100 мм, ГОСТ 10937–75. 4.5. Термостаты электрические суховоздушные, типа ТС, ТУ 64-1-1382–76. 4.6. Пипетки мерные, ГОСТ 1770–74. 4.7. Колбы конические, ГОСТ 1770–74. 4.8. Весы аналитические ВЛА-200-М. 4.9. Камера для стерильной сушки чашек Петри типа ЕМЗ 804-014СП. 5. Методика проведения контроля 5.1. Воздух аспирируют со скоростью от 10–20 до 150–200 л/мин на поверхность плотной питательной среды на чашках Петри. 5.2. Время аспирации (2–10 мин) зависит от концентрации микроорганизма в воздухе. 5.3. Термостатирование чашек Петри с пробами воздуха производится при температуре 25–40 °С в зависимости от биологической характеристики микроорганизма. 5.4. Метод предполагает учет по типичным морфологическим признакам количества колоний, выросших на 2–4 сутки и более после посева пробы воздуха в зависимости от видовой принадлежности микроорганизма. 5.5. Прямой метод позволяет учитывать на чашке Петри до 150–200 колоний. Результаты рассчитывают в кл/м . Примечание. Проблемной комиссии по гигиеническому нормированию с целью унификации методических подходов принято согласованное решение единицей измерения принять «клетки» (а не колониеобразующие клетки, хотя это правильно). Единицы измерения указывать обязательно. ![]() 5.6. Результаты замеров вносятся в протокол. Протокол оценки содержания промышленных штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны (рекомендуемый) 1. Дата Ф., И., О. работающего (рабочее место) _________________________________ 2. Профессия _______________________________________________________________ 3. Производство _____________________________________________________________ 4. Участок(технологическая стадия, операция) __________________________________ 5. Точка отбора (наименование оборудования у которого производится отбор) ____________________________________________________________________________ 6. Вид пробоотборника ________________________________________________________ 7. Дата последней метрологической поверки оборудования для отбора проб ___________ 8. Микроорганизм, содержание которого контролируется (род, вид, штамм) ____________ 9. Питательная среда, оптимум роста, время инкубации _____________________________ 10. Количественная и качественная характеристика выросших колоний (морфологические признаки – форма, цвет, консистенция; окраска по Граму; количество типичных колоний) _______________________________________________________________________________ 11. Результаты идентификации микроорганизмов с указанием метода _________________ 12. Результаты расчёта концентрации микроорганизма (кл/м ) ________________________ 13. Соотношение полученных результатов с уровнем ПДКр.з. __________________________ Отбор пробы произведен: _________________________(Ф., П., О., должность) ________________ (подпись, дата) Идентификация штамма и расчёт концентрации произведен: _________________________(Ф., П., О., должность) ________________ (подпись, дата) |
© 2002-2005
Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт охраны труда
(НИИОТ СПб ®) |